  | |  | Chères clientes, chers clients,
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| Pour ce mois de septembre, notre calendrier scientifique met en évidence un cas clinique à la frontière entre l'hématologie et la cytométrie en flux. Il s'agit d'une transformation d'un lymphome folliculaire (LF) en leucémie aiguë lymphoïde B (LAL-B).
Vous allez découvrir en quoi l'immunophénotypage par cytométrie en flux sur aspiration médullaire, combiné aux analyses hématologiques et morphologiques classiques (NFS, frottis sanguin), est essentiel à l'établissement du diagnostic final du patient, ainsi que les avantages de la cytométrie en flux pour le diagnostic d'analyses complexes.
Bonne lecture !
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| Bien cordialement,
Marketing Scientifique Sysmex France
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| | Du lymphome folliculaire (LF) vers la leucémie lymphoïde aiguë (LAL) | |
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• Le lymphome folliculaire (LF) est la forme la plus commune de lymphome indolent dans le monde occidental et représente environ 25 % des lymphomes malins [1]. La transformation du LF est souvent imprévisible, avec une progression de 25 % à 30 % des cas de LF – généralement en lymphome diffus à grandes cellules B, en lymphome de Hodgkin, en lymphome de Burkitt et, plus rarement, en lymphome ou en leucémie lymphoïde B (LAL-B) [2]. Ce phénomène conduit à un pronostic très défavorable, avec une espérance de vie d’environ dix mois post-diagnostic [3]. La détection de la progression de la maladie est par conséquent cruciale.
• La cytométrie en flux (CMF) peut notamment être utilisée pour détecter la progression d’un LF en LAL-B. Cette détection dépend de la capacité de la CMF à différencier les deux populations de cellules malignes.
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| | Clinique et Biologie | |
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• Un patient de 65 ans -connu pour un LF- se présente à nouveau aux urgences en raison d’une adénopathie au niveau des ganglions lymphatiques de l’aine droite et de l’aisselle droite. Une Numération Formule Sanguine (NFS) est réalisée et les résultats montrent un taux d’hémoglobine faible ainsi qu’une fusion des nuages des populations lymphocytaires et monocytaires sur les scattergrammes du canal WDF.
• Un frottis sanguin est alors effectué et des cellules blastiques ainsi que des lymphocytes à noyaux clivés sont observés. Les résultats morphologiques permettent de conclure qu’un immunophénotypage sur aspiration médullaire est nécessaire au diagnostic.
• Un immunophénotypage est ensuite réalisé sur le cytomètre en flux BD FACSCanto II disponible au laboratoire. Les résultats montrent l’expression de blastes et de lymphocytes B matures avec un diagnostic général de transformation de LF en LAL-B. L’échantillon est ensuite analysé sur notre cytomètre en flux XF-1600 et les résultats se sont avérés comparables.
• Ce cas clinique met en évidence les avantages de la cytométrie en flux pour le diagnostic de cas complexes. Il souligne également l’importance d’inclure les états pathologiques complexes lors de l’évaluation d’une nouvelle instrumentation afin de garantir une détection précise et fiable de populations multiples.
• Ces résultats sont décrits dans un poster scientifique [4] dont l’étude est menée à Sheffield au Royaume-Uni.
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| | Interprétation morphologique | |
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| Le myélogramme est réalisé et révèle des populations lymphocytaires et blastiques anormales, telles que représentées sur la figure 1.
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| Figure 1. Analyse morphologique du myélogramme
A) Nombreux blastes fortement vacuolisées évoquant une leucémie aiguë.
B) Petits lymphocytes à noyaux clivés, correspondant au LF déjà diagnostiqué.
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| | Interprétation des données d’immunophénotypage | |
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| • Un immunophénotypage est réalisé avec les anticorps suivants : CD3, CD7, CD10, CD13, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD22, CD33, CD34, CD38, CD45, CD117 et HLA-DR. L’expression cytoplasmique d’antigènes est aussi déterminée pour les antigènes suivants : CD3, CD22, CD79a, MPO et TdT. L’acquisition des données est effectuée sur BD FACSCanto II et sur Sysmex XF-1600 avec 20 000 cellules acquises pour chaque tube. L’analyse des données est réalisée avec les logiciels BD FACSDiva et Sysmex XF-1600.
• Les populations d’intérêt (lymphocytes et cellules blastiques) sont sélectionnées sur la base de leurs caractéristiques SSC et CD45, ce qui permet de déterminer leur profil d’expression antigénique et leur intensité de fluorescence (SI). En outre, la population double positive au CD20 et CD10 est sélectionnée pour identifier les cellules du LF. Les cellules du LF sélectionnées sont représentées sur les graphiques suivants : SSCvCD45, CD10vCD20, CD10vCD19 et CD20vCD19. Les résultats des deux cytomètres en flux sont ensuite comparés.
• L’analyse immunophénotypique sur les deux cytomètres en flux permet l’identification d’une population de cellules blastiques exprimant les antigènes CD19, HLA-DR, TdT (SI modérée), CD10 (SI forte) et CD45 (SI faible). Ces cellules n’expriment cependant pas le CD20. Cet immunophénotype est conforme aux critères de l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) relatifs à la LAL-B [2]. En outre, les deux cytomètres en flux permettent l’identification simultanée d’une population de lymphocytes B matures exprimant les CD20, CD19, CD10 (SI modérée) et CD45 (SI forte), mais n’exprimant pas l’antigène TdT – un immunophénotype correspondant au LF précédemment diagnostiqué. Les graphiques à points (Dot Plots) du Sysmex XF-1600 et du BD FACSCanto II sont présentés respectivement sur les figures 2A et 2B.
• Les deux cytomètres en flux permettent donc la détection de deux populations de cellules malignes : la population de cellules B matures du LF diagnostiqué antérieurement et la nouvelle population de cellules blastiques de LAL-B. Les résultats d’immunophénotypage délivrés par BD FACSCanto II et Sysmex XF-1600 sont comparables en ce qui concerne le profil de l’expression antigénique et l’intensité de fluorescence (SI).
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| Figure 2. Graphiques à points (Dot Plots) du Sysmex XF-1600 (A) et BD FACSCanto II (B). Les graphiques à points (Dot Plots) utilisés montrent le profil d’expression antigénique et l’intensité de fluorescence pour les antigènes CD19, HLADR, TdT, CD10, CD20 et CD45 sur Sysmex XF-1600 (A) et BD FACSCanto II (B). Les cellules blastiques sont représentées en rose, les lymphocytes en vert et les cellules du LF en turquoise sur les graphiques : SSCvCD45, CD10vCD20, CD10vCD19 et CD20vCD19.
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| | Pour aller plus loin | |
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| | Références bibliographiques | |
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| [1] Ciobanu A, Stanca O, Triantafyllidis I, and Lupu A. (2013): Indolent Lymphoma: Diagnosis and Prognosis in Medical Practice. Maedica; 8(4): 338–342.
[2] Swerdlow S et al. (2017): WHO Classification Of Tumours Of Haematopoetic And Lymphoid Tissues. 4th ed. Lyon: IARC, pp. 266–268.
[3] Morley NJ, Evans LS, Goepel J, and Hancock BW. (2008): Transformed follicular lymphoma: The 25-year experience of a UK provincial lymphoma treatment centre.
[4] Woodhead L and Stevens M. Haematology Department, Royal Hallamshire Hospital, Sheffield Teaching Hospitals NHS Foundation Trust. (2021): Comparing antibody expression and staining intensity between BD FACSCanto II and Sysmex XF-1600 in follicular lymphoma progressing to B-lymphoblastic leukaemia/lymphoma.
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