  | |  | Calendrier scientifique – Cas clinique de février 2025
Chères clientes, chers clients,
L'image ci-dessus montre une vue « in vitro » d'un échantillon sanguin (axée sur les érythrocytes), avec des signaux de fluorescence pour les marqueurs d'immunophénotypage d'intérêt. On observe également une cellule affectée, dépourvue de certains marqueurs, et en cours d'hémolyse, une manifestation clinique typique de la pathologie en question. En ce mois de février, notre calendrier scientifique met en lumière une pathologie rare et invalidante des cellules souches hématopoïétiques, caractérisée par une hémolyse intravasculaire chronique, des thromboses et des cytopénies liées à une insuffisance médullaire : l'hémoglobinurie paroxystique nocturne (HPN). Vous allez découvrir comment l'immunophénotypage, grâce à la technologie de cytométrie en flux, méthode de référence pour la détection des clones HPN, est un outil essentiel au diagnostic, au suivi et à la prise en charge des patients atteints de cette maladie.
Bonne lecture !
Bien cordialement,
Marketing Scientifique Sysmex France
| |
| |
|
| |
|
| | |
|
| | Hémoglobinurie Paroxystique Nocturne (HPN) | |
|
|
L'hémoglobinurie paroxystique nocturne (HPN) est une pathologie clonale rare et potentiellement mortelle des cellules souches hématopoïétiques, caractérisée par une hémolyse intravasculaire chronique provoquée par la cascade du complément, des thromboses et des cytopénies liées à une insuffisance médullaire. Elle résulte d'une mutation par expansion d'un clone qui inactive le gène PIG-A, situé sur le chromosome X, entraînant une déficience des protéines à ancrage liées au glycosylphosphatidylinositol (GPI) à la surface des globules rouges, des monocytes et des granulocytes. Il s’agit, entre autres, de deux protéines régulatrices du complément à la surface des globules rouges : les protéines CD55 (facteur accélérant la dégradation - DAF) et CD59 (inhibiteur membranaire de la lyse réactionnelle - MIRL). Une déficience de ces deux protéines conduit ainsi à la destruction des globules rouges in vivo [1].
Diagnostic
Le diagnostic d’HPN repose sur un certain nombre d’analyses de laboratoire :
- Cytométrie en flux des antigènes à ancrage GPI, mettant en évidence des populations d’érythrocytes et de leucocytes négatives
- Test de Coombs positif
- Anémie avec augmentation du nombre de réticulocytes
- Augmentation des taux de lactate déshydrogénase et de bilirubine
- Diminution du taux d’haptoglobine
- Présence d’hémoglobine libre sérique et hémoglobinurie
- Lésions organiques associées, dues à l'hémolyse et/ou la thrombose [1]
Immunophénotypage par cytométrie en flux, à l’aide du kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx
La cytométrie en flux est considérée comme la méthode de référence pour la détection des clones HPN, jouant ainsi un rôle important dans le diagnostic, le suivi et la prise en charge clinique des patients atteints d’HPN. La mise à jour la plus récente des directives consensuelles ICCS/ESCCA [2] garantit une détection sensible et précise des clones HPN, même mineurs.
Le kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx a justement été développé à partir de cette mise à jour des directives consensuelles ICCS/ESCCA, assurant un haut niveau de sensibilité de détection, en partie grâce à l'inclusion de FLAER (proaérolysine marquée à la fluorescéine Alexa Fluor™ 488). FLAER se lie aux ancrages GPI, permettant ainsi de mesurer la présence ou l'absence de ces derniers, indépendamment d'un marqueur de CD spécifique, sur les monocytes et les granulocytes neutrophiles.
Ce kit fournit deux tubes par patient :- Tube pour les globules rouges (GR) contenant CD71, CD59 et CD235a
- Tube pour les globules blancs (GB) contenant la proaérolysine, CD157, CD45, CD64, CD24, CD14 et CD15
Les cocktails pour chacun de ces tubes sont constitués de réactifs secs, ce qui signifie que les anticorps sont séchés sur la surface du tube. Cela permet une durée de conservation prolongée, ainsi qu’une livraison et un stockage à température ambiante. Les détails sur la préparation des échantillons, le gating et l'interprétation sont présentés dans les instructions d'utilisation (IFU).
|
|
|
|
| |
|
| | |
|
| | Clinique et Biologie | |
|
|
Une femme afro-américaine de 19 ans, sans antécédents particuliers, s'est présentée aux urgences pour une toux et des urines foncées. L’anamnèse révèle que sa sœur est porteuse du trait drépanocytaire.
Résultats hématologiques
Un échantillon sanguin est envoyé au laboratoire d'hématologie où un hémogramme est réalisé sur un analyseur XN-Series. Les résultats (Tables 1 et 2) mettent en évidence une anémie.
|
|
|
|
| |
| Table 1. Résultats numériques de différents paramètres d’intérêt de la NFS provenant d’un analyseur XN-Series.
|
|
| |
|
|
|
| |
| En résumé, les paramètres pertinents pour ce cas, avec les intervalles de référence propres à l’établissement hospitalier (entre parenthèses), sont les suivants :
|
|
|
|
| |
| Table 2. Résultats numériques des paramètres d’intérêt pertinents de la NFS provenant d’un analyseur XN-Series.
Résultats des autres analyses
D'autres analyses de laboratoire confirment que l'anémie est de nature hémolytique auto-immune (Table 3) :
|
|
|
|
| |
| Table 3. Résultats numériques des paramètres d’intérêt d’autres analyses de laboratoire.
Résultats de l’immunophénotypage par cytométrie en flux
La patiente consulte ensuite un hématologue qui demande alors des analyses pour une recherche d’HPN au laboratoire de cytométrie en flux. L’immunophénotypage est réalisé à l’aide du kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx. L'analyse des données met en évidence un clone HPN significatif des globules rouges (GR) et des globules blancs (GB), montrant clairement l'absence des antigènes à ancrage GPI.
Les résultats pour les globules rouges, obtenus avec le tube GR, révèlent un clone de type III à 76,75 % et un clone de type II à 2,54 % (Fig. 1).
|
|
|
|
| |
| Fig 1. Immunophénotypage à l’aide du tube GR du kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx, analysé sur XF-1600.
|
|
| |
|
|
|
| |
| Les résultats pour les globules blancs, obtenus avec le tube GB, révèlent un clone de granulocytes neutrophiles entre 95 et 97 % (Fig. 2) et un clone de monocytes à 98 % (Fig. 3).
|
|
|
|
| |
| Fig 2. Immunophénotypage à l’aide du tube GB du kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx, analysé sur XF-1600, et gating sur les granulocytes neutrophiles.
|
|
|
|
| |
| Fig 3. Immunophénotypage à l’aide du tube GB du kit d’analyse à haute sensibilité HPN DryFlowEx, analysé sur XF-1600, et gating sur les monocytes.
Grâce à ces informations, l'hématologue a été en mesure de déterminer que la patiente présentait à la fois des formes homozygotes (type III) et hétérozygotes (type II) d’HPN, et lui a prescrit de l’éculizumab, une immunothérapie qui se lie à la protéine C5 du complément et inhibe l'activation du système du complément [3]. Cette liaison empêche la dégradation des globules rouges dans la circulation sanguine.
Au cours des six derniers mois, le taux d’hémoglobine et la numération des globules rouges de la patiente se sont stabilisés dans l’intervalle des valeurs de référence et aucun autre épisode hémolytique n’est survenu.
|
|
|
|
| |
|
| | |
|
| | Pour aller plus loin | |
|
|
Grâce à sa gamme de produits, Sysmex peut aider les biologistes et les cliniciens à poser un diagnostic d’hémoglobinurie paroxystique nocturne (HPN) et les assister dans le traitement et le suivi des patients sujets à cette pathologie. Venez vite découvrir nos pages web dédiées à nos gammes d’hématologie et de cytométrie en flux !
|
|
|
|
| |
| | Références bibliographiques | |
|
| |
| |
|
| Mentions légales
Sysmex France S.A.S.
22 Avenue des Nations, ZAC Paris Nord 2,
CS 51414 Villepinte, 95944 Roissy CDG Cedex
Téléphone +33 1 48 17 01 90
Téléfax +33 1 48 63 23 50
info@sysmex.fr, www.sysmex.fr
|
Abonnement
Vous êtes maintenant abonné à notre bulletin d‘information. Vous pouvez lire nos › conditions générales ici.
Si vous souhaitez obtenir des informations complémentaires ou soumettre des questions, suggestions ou commentaires, n‘hésitez pas à nous contacter à l’adresse : › info@sysmex.fr
|
|
| |
| Vous souhaitez vous désabonner ? Cliquez › ici
| |
|
|
|
